Taq polimeraza

Taq polimeraza Descrierea acestei imagini, comentată și mai jos Structura unei polimeraze Taq legată de ADN la locul său activ Date esentiale
Nr. CE CE 2.7.7.7
numar CAS 9012-90-2
Activitate enzimatică
IUBMB Intrare IUBMB
IntEnz Vizualizare IntEnz
BRENDA Intrarea BRENDA
KEGG Intrare KEGG
MetaCyc Calea metabolică
PRIAM Profil
PDB RCSB PDB PDBe PDBj PDBsum
MERGE AmiGO / EGO
Domeniul exonucleazei Taq polimerazei Descrierea acestei imagini, comentată și mai jos Taq polimeraza complexată cu un inhibitor Fab ( PDB  1BGX ) Domeniul proteinelor
Pfam PF09281
InterPro IPR015361
SCOP 1qtm
SUPERFAMILIE 1qtm

Taq polimeraza ( de asemenea , cunoscut sub numele de „  Taq pol“ sau pur și simplu „  Taq  “) este o varietate de ADN polimeraze termostabile numit dupa Thermus aquaticus , o bacterie termofilă din care aceasta enzima a fost izolată pentru prima dată în 1969.

Timpul său de înjumătățire enzimatică la 95  ° C este de 40 de minute.

Este lipsită de activitate de exonuclează , ceea ce face imposibilă corectarea erorii în timpul copierii.

Unele rezultate PCR slabe ( negative negative ) pe anumite probe de ADN (în special din urină sau din spută ), s-ar putea datora unui inhibitor al acestei enzime prezent în urină, dar nu și în sânge .

Utilizări

Această enzimă este utilizată în biochimie pentru a produce reacții PCR .

Deoarece face o eroare pentru fiecare milion de perechi de baze, ampliconul (produsul reacției) va fi utilizat pentru analiză.

Dacă se dorește „clonarea” produsului de reacție, atunci se va folosi mai degrabă o ADN polimerază Pwo  (en) sau o ADN polimerază Pfu , care fac mai puține erori.

Clonarea A-T

Taq polimeraza adaugă un "  A " la sfârșitul fragmentului generat.

Acest lucru face posibilă efectuarea clonării finale coezive cu un vector având un "  T ".

„Pornire la cald”

„Hot Start” desemnează o enzimă care are un inhibitor ( proteină chaperonă sau moleculă chimică).

Acest inhibitor trebuie îndepărtat prin încălzirea enzimei la 95  ° C timp de 10 sau 15 minute. Această operație se numește „  activarea enzimei  ”.

Vezi și tu

Articole similare

linkuri externe

Note și referințe

  1. (în) Soo Hyun Eom, Jimin Wang și Thomas A. Steitz , "  Structura Taq polimerazei cu ADN polimerază activă pe site  " , Nature , vol.  382, nr .  6588, 18 iulie 1996, p.  278-281 ( PMID  8717047 , DOI  10.1038 / 382278a0 , citiți online )
  2. (în) R. Murali, DJ Sharkey, JL Daiss și HM Krishna Murthy , „  Structura cristalină a ADN polimerazei Taq în complex cu un Fab inhibitor: Fabul este direcționat împotriva unui an intermediar în dinamica elico-bobină a enzimei  ” , Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America , vol.  95, nr .  21, Octombrie 1998, p.  12562-12567 ( PMID  9770525 , PMCID  22870 , DOI  10.1073 / pnas.95.21.12562 , JSTOR  46098 , Bibcode  1998PNAS ... 9512562M , citiți online )
  3. (în) A. Chien, DB Edgar și JM Trela , "  Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophilic Thermus aquaticus  " , Journal of Bacteriology , Vol.  127, nr .  3, Septembrie 1976, p.  1550-1557 ( PMID  8432 , PMCID  232952 , citiți online )
  4. Dieter Perl, Uwe Mueller, Udo Heinemann și Franz X. Schmid, 2000, „  Două reziduuri de aminoacizi expuse conferă termostabilitate unei proteine ​​de șoc la rece  ”, Nature structural biology , volumul 7, numărul 5, paginile 380 până la 383.
  5. Inițierea la biologia moleculară; Modul: Amplificare genică , Fundația Mérieux