Coloratia Gram își datorează numele bacteriologul danez Hans Christian Gram , care a dezvoltat protocolul în 1884. Este o pată care face posibilă pentru a evidenția proprietățile peretelui bacterian , și de a folosi aceste proprietăți pentru a distinge și bacterii clasificat. Avantajul său este că oferă informații rapide, ușoare și ieftine despre bacteriile prezente într-un produs sau mediu, atât în ceea ce privește tipul, cât și forma.
Astfel, oamenii de știință pot distinge bacteriile Gram-pozitive - cunoscute și sub numele de „Gram-pozitive” - cu un singur perete cu o cantitate mare de peptidoglican , de bacteriile Gram-negative, compuse din mai puțin peptidoglican, dar cu o membrană. Acest tip de clasificare nu este lipsit de consecințe în domeniul medical (rezistența bacteriilor și eficacitatea antibioticelor în funcție de tipul de bacterie).
Este necesar să aveți un frotiu fix
Iată diferitele etape ale acestei colorări:
Etapele 1 și 2 colorează conținutul bacteriilor în violet . Violeta de gențiană se leagă de componentele citoplasmatice ale tuturor bacteriilor. Lugol remediază această colorare internă.
Pasul 3 (alcoolul) este utilizat pentru decolorarea citoplasmei bacteriilor despre care se va spune că este „ Gram negativă ”. Într-adevăr, acestea au un perete sărac în peptidoglicanii - deci mai subțire - care va permite trecerea alcoolului (moleculă hidrofilă ) sau a amestecului alcool-acetonă și care va decolora citoplasma prin eliminarea violetei de gențiană. Dimpotrivă, pentru așa-numitele bacterii „ Gram-pozitive ” , peretele constituie o barieră impermeabilă la alcool deoarece este compus dintr-un „strat” mai mare de peptidoglicani. Peretele este deci mai gros. Bacteriile vor rămâne apoi de culoare purpurie.
Pasul 4 este o contracoloră cu scopul de a oferi bacteriilor Gram-negative decolorate anterior o nuanță roz care să le permită vizualizarea la microscop. Bacteriile Gram-pozitive rămase violete vor fi, evident, insensibile la această culoare mai palidă decât violetul care le învață citoplasma.
Pata de gram face astfel posibilă diferențierea peretelui bacterian și împărțirea bacteriilor în două grupuri mari:
Aceste diferențe de colorare și diferențele de formă ( bacil sau coci ) sunt la originea clasificării bacteriilor.
Notă : Anumite bacterii rămân insensibile la această colorare, acesta este cazul, printre altele, al Mollicutes sau numit Ténéricutes, una dintre cele trei clase majore de Eubacteria (Gracilicutes, Firmicutes, Ténéricutes). Într-adevăr, aceste bacterii sunt lipsite de perete și apar Gram -.
Pata Gram este frecvent utilizată în microbiologie pentru a detecta bacteriile Gram pozitive sau negative. Acest lucru face posibilă diferențierea și clasificarea diferitelor populații de microorganisme. De exemplu, atunci când există suspiciunea de infecție a organismului într-o biopsie, această colorare poate fi utilizată urmată de o analiză histopatologică pentru a pune un diagnostic. Această metodă are avantajul de a fi mai rapidă decât o cultură convențională.
Bacteriile detectate sunt clasificate în două categorii. De exemplu:
Scopul acestei metode este de a confirma rapid dacă o bacterie este Gram pozitivă sau Gram negativă fără a trece prin etapele obișnuite de colorare și fără a utiliza un microscop. Este suficient să contactați (pe o lamă de microscop) o colonie izolată cu o picătură de soluție de hidroxid de potasiu 3% ( KOH ). Folosind o pipetă Pasteur , amestecăm. Câteva secunde mai târziu, amestecul este tras în sus. Dacă se formează un filament între pipetă și lamelă, atunci colonia izolată este formată din bacterii Gram negative; dacă nimic nu este antrenat de pipetă, avem de-a face cu bacterii Gram pozitive. Metoda a fost propusă ca control al calității pentru colorarea Gram în 1977. În timpul unei evaluări (John Buck, 1982), rezultatele obținute prin această metodă pe 400 de tulpini de bacterii marine au fost confirmate de colorarea Gram.