Cei Coloranții societății Hoechst fac parte din familia coloranților folosind markeri fluorescenți utilizate pentru marcarea ADN . Acești compuși, din familia bisbenzimidelor , au fost inițial dezvoltați de Hoechst AG, care a numărat creațiile sale. Astfel, Hoechst 33342 este compusul nr . 33342 dezvoltat de această companie. Există trei compuși similari de colorare ADN: Hoechst 33258 , Hoechst 33342 și Hoechst 34580 . Coloranții Hoechst 33258 și Hoechst 33342 sunt cei mai frecvenți și au spectre de excitație / emisie similare. Hoechst 33342 are o permeabilitate de celule de zece ori mai mare decât H33258.
Ambii compuși sunt excitați cu raze ultraviolete la o lungime de undă de aproximativ 350 nm , emit ambele o lumină albastră-ciană prin fluorescență . Lungimea de undă maximă a emisiilor este de 461 nm . Când nu este legat, vopseaua își fluorescă maximul între 510 și 540 nm . Colorarea Hoechst poate fi excitată de o lampă cu xenon sau o lampă cu vapori de mercur sau de un laser UV. Schimbarea Stokes între maximele de excitație și emisiune face ca colorarea Hoechst să fie foarte utilă în experimentele în care se utilizează un număr mare de fluorofori . Intensitatea fluorescenței lui Hoechst crește pata cu pH a solventului .
Coloranții Hoechst sunt solubili în apă și în solvenți organici precum dimetilformamida sau dimetilsulfoxidul . Soluțiile pot fi obținute până la o concentrație de 10 mg / mℓ . Soluțiile apoase sunt stabile, mai mult de șase luni dacă sunt depozitate între 2 și 6 ° C și protejate de lumină. Pentru conversații mai lungi, soluțiile sunt congelate la o temperatură sub -20 ° C .
Vopseaua este fixată la canelura minoră a ADN-ului cu dublu catenă cu o afinitate mai mare pentru secvențele bogate în adenină și timină . Atașarea la aceste secvențe bogate în AT mărește foarte mult fluorescența obținută. Colorarea Hoechst este permeabilă celulelor: face posibilă marcarea celulelor vii fixe.
O concentrație cuprinsă între 0,1 și 12 ug / ml este în general utilizat pentru colorarea eucariote sau procariote celule . Etichetarea durează de la unu la treizeci de minute , la temperatura camerei sau 37 ° C , apoi celulele sunt clătite. Fluorescența verde, corespunzătoare colorantului nelegat, poate fi observată dacă s-a utilizat prea mult compus sau dacă proba nu a fost clătită corespunzător. Hoechst pata este adesea folosit ca o alternativă la un alt acid nucleic colorant : DAPI .
Principalele diferențe dintre coloranții Hoechst și DAPI:
Vopselele Hoechst 33342 și 33258 sunt oprite („stinse” de laboratorul frenglish , [kwenche] în fonetic ) de bromodeoxiuridină (BrdU), care este utilizată pentru a detecta celulele care se divid. Acestea din urmă integrează BrdU în ADN-ul nou sintetizat în locul timidinei . Când BrdU este încorporat în ADN, se crede că restul de bromură distorsionează canelura minoră a helixului dublu și împiedică colorantul Hoechst să ajungă la locul său de legare optim. Vopseaua Hoechst poate fi utilizată împreună cu BrdU pentru a monitoriza progresia ciclului celular .
Coloranții Hoechst sunt adesea folosiți pentru a colora ADN-ul genomic în următoarele cazuri:
Datorită atașării lor la ADN, acești coloranți interferează cu replicarea ADN în timpul diviziunii celulare . În consecință, acestea sunt potențial mutagene și cancerigene , astfel încât un anumit număr de reguli trebuie respectate atunci când se manipulează și se tratează ca deșeuri. Pata Hoechst este utilizată pentru sortarea materialului seminal în cazul stocurilor umane. Siguranța sa a fost dezbătută.