Transferul (limba engleză blot ) este o tehnica de biologie moleculara si biochimie , care permite prezența unei molecule specifice ( ADN , ARN , proteină , etc.) într - o probă biologică (extractul celular, fluid biologic, fracție purificată ...) . Transferul constă în transferul moleculelor de analizat pe un suport solid (de exemplu, o membrană de nitroceluloză sau nailon ), opțional după o etapă de separare, cum ar fi electroforeza pe gel , apoi în utilizarea unei sonde specifice (fragment de ADN sau ARN, anticorp etc.) .) a țintei dorite. Există mai multe variante în funcție de moleculele analizate și de metodele de detectare utilizate.
Aceste tehnici, ale căror prime dezvoltări datează de la mijlocul anilor 1970, sunt încă utilizate în mod regulat în cercetare sau în clinică.
Prima tehnică de transfer de molecule a fost dezvoltată în 1976 de Edwin Southern . Genomic ADN - ul a fost denaturat și se taie, apoi fragmentele obținute au fost separate prin electroforeză . După transferul la o membrană, detectarea a fost efectuată de sonde ADN radioactive.
Această tehnică a fost apoi adaptată pentru alte tipuri de molecule: ARN și proteine apoi, mai recent, pentru lipide sau pentru analiza interacțiunilor inter-moleculare.
Principalele tehnici de transfer și analiză a interacțiunilor sunt enumerate în tabelul următor.
Tehnic | Numele de familie | Molecule | Invenţie |
---|---|---|---|
Transfer | Southern blot | ADN | 1975, Sud |
Northern blot | ARN | 1975, Awine și colab. | |
Western blot | Proteină | 1979, Towbin și 1981, Burnette | |
Analiza interacțiunilor | Blot sud-vest | ADN-proteine | 1980, Bowen și colab. |
Test de schimbare a mobilității electroforetice | ADN-proteine | 1981, Garner & Revzin și 1981, Fried & Crothers | |
Pete nord-vestice | ARN-proteine | 1984, Adams și colab. | |
Blot extrem de occidental | Proteine-proteine | 1994, Hummler și colab. |
În prezent, alte tehnici de analiză încep să înlocuiască anumite tehnici de transfer. De exemplu, PCR (1983) și microarrays pentru analiza ADN și ARN .
Transferul ADN se numește în engleză Southern blot , în omagiu pentru inventatorul său. Celelalte tehnici se numesc Northern blot pentru ARN, Western blot pentru proteine și Far-Eastern blot pentru lipide (cu referire, într-un mod plin de umor, la cele 4 puncte cardinale: nord , sud , est și vest în engleză). Numai cuvântul Sud provine dintr-un nume propriu și ia o literă mare.
În franceză, se recomandă utilizarea, de exemplu pentru proteine, a termenilor de transfer de proteine sau de transfer occidental . Denumirea în engleză a tehnicilor este foarte des utilizată în literatură sau în laboratoare.
Termenul blot este uneori întâlnit pentru a traduce blot (cu referire la traducerea literală a blot care înseamnă sarcină sau pentru a usca , pentru a transmite o blot ). Este totuși un neologism puțin folosit.
Aceste tehnici au loc în general în 3 sau 4 etape (prima etapă, separarea, fiind opțională).