Există două metode principale de marcare a acizilor nucleici . Unul necesită utilizarea monomerilor de acid nucleic (ADN sau ARN), nucleotide , făcute radioactive. Aceștia sunt încorporați de celulă în firele de acizi nucleici neosintetizați și îi fac radioactivi. Cealaltă se face prin agenți fluorescenți intercalați . Aceste elemente sunt inserate între bazele firelor de acid nucleic și astfel le fac fluorescente sub razele UV.
Marcarea in vivo poate fi efectuată folosind nucleotide radioactive.
Dacă se dorește etichetarea specifică a ADN-ului, se folosește timidina deoarece nu este prezentă în ARN . Se face radioactiv prin înlocuirea unui atom de hidrogen cu un atom de tritiu . Apoi este fosforilat pentru a da timidină monofosfat (TMP). Acest precursor poate fi apoi introdus in vivo și astfel poate intra în contact cu celulele. Mașinile celulare continuă fosforilarea, formând succesiv timidină difosfat apoi timidină trifosfat. Această din urmă moleculă poate fi încorporată într-o catenă de ADN în timpul sintezei sale. Catenă de ADN nou sintetizată devine apoi radioactivă și, prin urmare, detectabilă.
Pentru etichetarea specifică a ARN-ului, se utilizează uridina . Uridina poate fi, de asemenea, marcată cu tritiu.
Pentru a eticheta ADN și ARN în același timp, este posibil să se utilizeze fosfat radioactiv. Pur și simplu puneți în mijlocul 32 PO 4 3- . Intră în celulă și este încorporat în diferiții precursori.
Aceste trei metode au caracteristica de a marca numai firele de acizi nucleici în timpul sintezei.
In vitro, este posibil să se eticheteze ADN-ul în masa sa. Adică se pot introduce atomi radioactivi fie în lungimea sa (marcaj intern), fie la capete.
De asemenea, este posibil să se utilizeze markeri fluorescenți, cum ar fi bromură de etidiu sau iodură de propidiu , care sunt agenți de intercalare a acidului nucleic, adesea utilizați pentru a dezvălui electroforeza, de exemplu.
Prin etichetare traducere nick ( traducere nick )
Folosim pentru asta:
Se obține în cele din urmă ADN bicatenar, dintre care anumite regiuni sunt puternic marcate.