Fragilitate osmotică

Fragilitate osmotică Date esentiale

Plasă	„ D009996 ”

Unul dintre indicii care pot fi utilizați pentru a determina capacitatea celulelor roșii din sânge de a rezista hemolizei în urma șocului hiposmotic (hipoton) este măsurarea fragilității osmotice a celulelor. Acest parametru este utilizat în general pentru a caracteriza rezistența membranei plasmatice a globulelor roșii .

Tehnici

Limita de fragilitate osmotică (fo)

Limita fragilității osmotice în soluția hipotonică este determinată de cea mai mică osmolaritate pe care o pot suferi eritrocitele fără inducerea hemolizei. Lizează celula se determină prin observarea schimbare turbiditatea care apare atunci când integritatea membranei plasmatice este compromisă. Acest lucru este detectat folosind un spectrofotometru după ce probele au fost adăugate la soluții experimentale de sare, la diferite osmolarități și compoziții. După un timp de incubație, densitatea optică este măsurată la 625 nm , această lungime de undă oferind cea mai bună diferență între celulele intacte și celulele lizate. În practică, limita fragilității osmotice este valoarea densității optice care corespunde cu 50% din cea obținută în condiții izosmotice .

O altă metodă este de a măsura absorbanța hemoglobinei la 450 nm . După incubarea celulelor roșii din sânge (spălate cu un tampon fosfat la pH = 7,4) în diferite diluții ale unei soluții saline, suspensiile sunt centrifugate la 2000 rotații pe minut timp de 10 minute. Absorbanța hemoglobinei libere, eliberată în supernatant de globulele roșii lizate, este evaluată de legea Beer-Lambert :

{\ displaystyle A_ {Hb} = {\ frac {\ epsilon \ (cm ^ {- 1} .mol ​​^ {- 1} .L) \ times C_ {Hb} (gL ^ {- 1})} { PM_ {Hb} (g.mol ^ {- 1})}}}

ε este coeficientul de extincție molar, este concentrația de hemoglobină și este greutatea moleculară a hemoglobinei egală cu 64.500. Grosimea rezervorului este, în mod implicit, 1 cm . ${\ displaystyle C_ {Hb}}$ ${\ displaystyle PM_ {Hb}}$

Hemoliza, exprimată în procente, se calculează prin raportul absorbantelor:

{\ displaystyle \% H {\ acute {e}} molyse = {\ frac {(1-A _ {{\ acute {e}} sample})} {A_ {total}}} \ times 100}

Limita fragilității osmotice (50%) este exprimată în raport cu 100% din hemoliza obținută cu apă distilată (0 osmoli ).

Constanta de timp a hemolizei (TH 50 )

Acesta este timpul necesar pentru a obține 50% hemoliză într-o soluție de osmolaritate definită (vezi curba de hemoliză).

Referințe

Aegean S, 1998 . Demonstrarea căilor de conductanță în eritrocitele nucleate ale peștilor. Teză, Universitatea din Bretania de Vest .
Beutler, E., 1983 . Fragilitate osmotică. Hematologie , New York: McGraw-Hill, 1626-1627