Determinarea glucozei de către DNS

Determinarea glucozei de către DNS este o determinare colorimetrică a glucozei .

Principiu

Se utilizează proprietățile reducătoare ale glucozei . Când este fierbinte și într-un mediu alcalin , există reducerea acidului 3,5-dinitrosalilcilic sau DNS (numit și acid 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzoic) care acționează ca oxidant , glucoza fiind agentul reducător .

Reacția de reducere a acidului 3,5-dinitrosalicilic la acid 3-amino-5-nitrosalicilic (denumit și acid 3-amino-2-hidroxi-5-nitrobenzoic):

Glucoza, pe de altă parte, este oxidată în diferite produse de oxidare:

Glc → produse de oxidare + n e -

Acidul 3-amino-5-nitrosalicilic este un compus roșu. Această reacție nu este stoichiometrică : nu există o evaluare redox . Intensitatea colorării roșii este proporțională cu concentrația osului dacă se operează în condiții fizico-chimice constante. Liniile de calibrare nu trec întotdeauna prin origine.

Această metodă nu se aplică la determinarea unui amestec complex de carbohidrați reducători.

Echipament

Spectrofotometru și cuvele sale
Eprubete spălate și uscate
Pipetă automată
Pahare
Flacon volumetric

Soluții

0,005 mol / L soluție de glucoză
Soluție DNS (la 100 ml)
- 1g acid 3,5-dinitrosalicilic
- 50 ml soluție NaOH 2M
- 30g tartrat de sodiu-potasiu tetrahidrat
- apă distilată qsp 100mL
Apa distilata
Soluție de dozare

Pași

Pregătirea intervalului de calibrare

Într-o serie de tuburi:

introduceți 0 - 0,2 - 0,4 - 0,6 - 0,9 - 1,2 ml de 0,005 mol / L soluție de glucoză;
reglați fiecare tub la 1,5 ml cu apă distilată;
adăugați 1 ml de 3-5 reactivi DNS;
amestecați și acoperiți tuburile cu bumbac cardat și folie de aluminiu;
se aduce într-o baie de apă la 100 ° C timp de exact 5 min;
se răcește și se adaugă 7,5 ml (qs 10 ml ) de apă distilată în fiecare tub (se presupune că evaporarea este aceeași pentru fiecare tub), se omogenizează și se lasă să stea timp de 15 min.

Citește absorbanța la 540 nm față de martor (tub n o 0).

Testarea

Acestea trebuie tratate în aceleași condiții de funcționare.
Efectuați testul cuporțiuni de test diluate corespunzător de 0,5 ml , suplimentate cu 1 ml de apă distilată și 1 ml de DNS.

Tabel colorimetric (rezultate experimentale)

Tub nr.	0	1	2	3	4	5
0,005 mol / L soluție etalon de glucoză în ml	0	0,2	0,4	0,6	0,9	1.2
Apă distilată în ml (înainte de încălzire)	1.5	1.3	1.1	0,9	0,6	0,3
DNS în ml	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
Apă distilată în ml (după încălzire)	7.5	7.5	7.5	7.5	7.5	7.5
Cantitatea de glucoză în µmol	0	1.0	2.0	3.0	4.5	6.0

Acest tabel reprezintă ce ar trebui pus în fiecare tub și cât de mult.